BioximiaForYou

amylase

Alfa-amylase (diastase, alfa-1,4-glukan-4-glukanhydrolase) tilhører klassen av hydrolaser som katalyserer hydrolysen av polysakkarider, inkludert stivelse og glykogen, til dekstriner og enkle di- og monosakkarider (maltose, glukose).

Amylase i de største konsentrasjonene er i henholdsvis bukspyttkjertelen og spyttkjertlene - i form av bukspyttkjertel og spytt isoenzymer. Under fysiologiske forhold består serumamylase av 40% av pankreasamylase og 60% av spyttamylase. Ved å bruke spesifikke inhibitorer eller separasjon ved elektroforese, er det mulig å fastslå opprinnelsen til enzymet tilstede i plasma. Amylase fjernes fra plasmaet gjennom nyrene og utskilles i urinen. Dette fører til større informasjonsinnhold som bestemmer aktiviteten av alfa-amylase i urinen som en test som vurderer funksjonell tilstand av bukspyttkjertelen. Veksten av amylaseaktivitet er av største betydning ved diagnosen sykdommer i bukspyttkjertelen.

Klinisk og diagnostisk verdi:

Aktiviteten av blodalfa-amylase og urin varierer sterkt i løpet av dagen.

Hyperamalasemi - en økning i aktiviteten av amylase i blodserumet.

Ø Akutt pankreatitt - Maksimumsverdier oppstår i de første 6-12 timer etter at symptomene på sykdommen er oppstått. Etter denne tiden reduseres enzymaktiviteten, normaliseres i 2-5 dager. Hvis aktiviteten forblir økt i mer enn 5 dager, indikerer dette en økning i betennelse.

Ø Forverring i kronisk pankreatitt

Ø Perforering av duodenalsår

Ø Intestinal obstruksjon

Ø Akutt blindtarmbetennelse

Ø Alkaloider (morfin, heroin, kodein)

Ø Metanolforgiftning

Ø Store doser etanol (for alkoholikere)

Hypoamylasemi - en reduksjon i aktiviteten av amylase i blodserumet (praktisk talt ingen diagnostisk verdi).

Ø Pankreasnekrose

Ø Myokardinfarkt

Hyperamalazuri - økt utskillelse av amylase i urinen.

Ø Akutt pankreatitt - En økning i enzymaktiviteten observeres i løpet av de første 24 timene av betennelse. Den økte utskillelsen av enzymet i urinen vedvarer i de neste 7 til 10 dager, til tross for at aktiviteten av amylase i blodet etter 3-4 dager er normal.

Ø Kreft i bukspyttkjertelen

Ø Perforering av duodenalsår

Ø Gallesteinsykdom

Ø Sykdommer i spyttkjertlene, parotitt, stein i spyttkanaler

Hypoamylase - en reduksjon i frigjøring av amylase i urinen.

Ø Nyresykdom

Ø leversykdom

"Bestemmelse av alfa-amylaseaktivitet i biologiske væsker ved den enhetlige Karavey-metoden"

Prinsipp: Under virkningen av alfa-amylase blir stivelse hydrolysert for å danne produkter som ikke gir fargereaksjon med jod. Intensiteten av reduksjonen i fargene av jod-stivelseskomplekset per tidsenhet er proporsjonal med enzymets aktivitet.

Det undersøkte materialet: friskt serum, urin.

Pakken inneholder:

Reagens №1 - buffer

Reagens nr. 2 - konsentrert substrat

Reagens №3 - konsentrert jodløsning

Reagens nr. 4 - kaliumfluoridoppløsning

Reagens nr. 5 - saltsyre

Fremstilling av reagenser for analyseprosedyren:

Underlagsarbeidsløsning: Bland reagensene nr. 1 og nr. 2 i et forhold på 24: 1.

Arbeidsløsning av jod: Bland destillert vann, reagens nr. 3 og reagens nr. 4 i forholdet 7: 1: 2.

Arbeidsløsning av saltsyre: fortynn innholdet av flaske nummer 5 med destillert vann 16 ganger.

Forutsetningen:

reagens

Erfarne prøve

Kontrollprøve

BioXplorer

amylase

α-Amylase [Na - (1,4)-glukan-4-glucanohydrolases, EC 3.2.1.1] enzymene hydrolyserende 1,4 α -glikozidnye intern kommunikasjon stivelse, glykogen og andre glukosepolymerer. Hos mennesker er de viktigste kildene til a-amylase bukspyttkjertelen og spyttkjertlene. Tallrike isoformer isolert fra biologiske væsker og vev, er sannsynligvis heterogene produkter post-translasjonelle endringer av to familier av enzymene amylase, idet syntesen derav koder for to genlocus Ata-1, spytt (S) type amylase og Ata-2 bukspyttkjertel (P) type enzym, nært beslektet i kromosom 1. Isoenzymer C og P har ikke store forskjeller i aminosyresammensetning. To isoformer ble isolert ved gelfiltrering på Sephadex i C-amylasefraksjonen, hvorav den ene inneholder karbohydrater. Molekylær masse karbohydratholdige isoformer, 57 kDa, karbohydratfri - 55 kDa. Isoelektriske punkter av de viktigste isoformene av C-isoamylaser fra 5,5 til 6,5. P-gruppen av isoamylase har en lavere molekylvekt (53 kDa) og inneholder ikke karbohydrater. De isoelektriske punkter av disse proteinene varierer fra 5,7 til 7,0.

Overbevisende bevis for at P-type amylase dannes bare i bukspyttkjertelen, er fraværet av dette isoenzymet hos personer med total pankreathektomi. A-amylase C-isoenzymet kan derimot syntetiseres i forskjellige organer og vev. Høy aktivitet av C-amylase er festet i egglederens vev og innholdet i ovariecysten. Den spesifikke gruppen isoamylaser fremstilt av vevene fra de kvinnelige kjønnsorganene blir ikke påvist i serum eller urin hos friske mennesker; fordelingen av isoamylaser er identisk hos menn og kvinner. Isoamylaser tilhørende C-gruppen finnes også i morsmelk og sårvæske.

Den kliniske signifikansen av å bestemme aktiviteten av amylase i serumet.

Bestemmelse av serum-a-amylaseaktivitet er den vanligste testen for diagnostisering av akutt pankreatitt. Ved akutt pankreatitt øker enzymaktiviteten i serum 3-12 timer etter et smertefullt angrep, når maksimalt etter 20-30 timer, og vender tilbake til normal med et gunstig kurs innen fire dager. Aktiviteten av a-amylase (diastase) i urinen øker 6-10 timer etter en økning i serumaktivitet og vender tilbake til normal, oftest tre dager etter en økning.

Det er nå allment kjent at en økning i den totale aktiviteten av a-amylase ikke er spesifikk for pankreatitt og andre sykdommer i bukspyttkjertelen. Kliniske studier har vist at en økning i a-amylaseaktivitet oppstår i en rekke sykdommer, som inkluderer intestinal obstruksjon, galdeveiesykdommer, blindtarmsbetennelse, parotitt og ektopisk graviditet. Sensitivitet og spesifisitet av det α-amylase i diagnostisering av akutt pankreatitt øker ved endring av grensene for normale verdier (diskrimineringsnivå norm og patologi - aktivnost1,5-2 ganger den øvre grensen for normal). I dette tilfellet er bestemmelsen av a-amylaseaktivitet det mest informative den første dagen i utviklingen av akutt pankreatitt. Ifølge noen forfattere har bestemmelsen av serum-a-amylaseaktivitet ved kronisk pankreatitt ingen diagnostisk verdi.

Hos mennesker, a-amylase, som passerer fritt gjennom filtreringsbarrieren av nyrene, reabsorberer epitelceller i nyre-tubulene på samme måte som andre serummolekyler med lav molekylvekt. En økning i serumamylaseaktivitet kan skyldes svekket enzymeliminering. Et eksempel er en tilstand som kalles makroamylasemi, når et enzym er bundet til serumimmunoglobuliner og danner et makromolekylært kompleks. Et slikt kompleks filtreres ikke inn i urinen og kan ikke fjernes ved hjelp av andre mekanismer, noe som fører til en signifikant og noen ganger langvarig økning i a-amylaseaktiviteten i blodserumet. Makroamylasemi forekommer hos raske personer med en frekvens på 1%, hos personer med hyperamylasemi med en frekvens på 2,5%. Makroamylasemi kan diagnostiseres ved hjelp av ultracentrifugeringsmetoden, ESP, gelkromatografi, en enkel test av utfelling av komplekset med polyetylenglykol er også blitt foreslått.

Serum a-amylaseaktiviteten økes ofte i nyresvikt, men det er ikke helt klart hva som forårsaker denne økningen - en økning i dannelsen av et enzym eller en reduksjon i eliminasjonen. I slike tilfeller kan ytterligere opplysninger gis ved å bestemme hastigheten på a-amylase utskillelse eller beregning av enzymklarering.

Ifølge mange forfattere er den mest sensitive og spesifikke testen for diagnosen pankreatitt aktivitetsnivået for P-isoenzym-a-amylasen. Denne testen er spesielt viktig hvis en normal generell amylaseaktivitet er funnet hos en pasient med en presumptiv diagnose av pankreatitt. Ved redusert P-amylase aktivitet kan kronisk pankreatitt diagnostiseres. Andelen P-isoamylase i totalaktiviteten til a-amylase er signifikant høyere i urinen enn i serum, muligens på grunn av forskjeller i utskillelsen av isoenzymer ved nyrene. Likevel er den diagnostiske verdien av å bestemme aktiviteten av a-amylase-isoenzymer i urinen dårligere enn i blodet.

Eksperiment - den grunnleggende metode for vitenskap
Både observasjon og måling er inkludert i en så kompleks grunnleggende metode for vitenskap som eksperiment. I motsetning til observasjon er et eksperiment kjennetegnet ved en forskeres innblanding i objektene som studeres, ved en aktiv innflytelse på emnet.

Jord er en unik del av biosfæren
På slutten av 1800-tallet. V. Dokuchaev, den store russiske naturvitenskapsmannen, ved studier av chernozem og andre jordarter i den russiske dalen og Kaukasus, fastslår at jord er naturlige legemer i deres ytre egenskaper og egenskaper av krefter.

Urinanalyse
Urinalyse er en serie kjemiske og fysiske tester, hvor resultatene viser prøvens spesifikke tyngde og pH og tilstedeværelse og nivå av blod, glukose og andre komponenter i prøven. Siden grunnleggende data i kronisk nyresvikt og mottar.

amylase

α - Amylase (diastase, 1,4 - a - D - glukanhydrolase, EC 3.2.1.1.) katalyserer hydrolysen av a - 1,4 - glukosidbindinger av stivelse, glykogen og deres beslektede polysakkarider til maltose, dextriner og andre polymerer. Molekylærmassen til enzymet er ca. 48 000 D. Molekylet inneholder et kalsiumatom som ikke bare aktiverer enzymet, men beskytter det også mot virkningen av proteaser, og aktiviteten av amylase øker med påvirkning av klorioner. I blodet er det representert av to isoenzymer: bukspyttkjertel - P-type og spytt - S-type, som hver er delt inn i flere fraksjoner. S-type isoenzym er generelt 45-70% (i gjennomsnitt 57%), resten er i P-typen. Begge isoenzymer har nesten identiske katalytiske og immunologiske egenskaper, avvike noe i elektroforetisk mobilitet, men er godt separert ved gelfiltrering på DEAE - Sephadex. Det er også makroamylase, som ikke utskilles av nyrene, men kan finnes i normalt blodserum (ca. 1% av friske mennesker) og patologi (2,5%).

Høy amylaseaktivitet observeres i parotid og bukspyttkjertelen. Imidlertid er dens aktivitet, men mye lavere, funnet i de store og tynne tarmene, skjelettmuskler, lever, nyrer, lunger, eggleder, fettvev. I blodet er enzymet forbundet med både plasmaproteiner og dannede elementer. Enzymeaktiviteten er den samme for menn og kvinner, og er ikke avhengig av innholdet av maten som er tatt og tidspunktet på dagen.

Eksisterende metoder for å studere aktiviteten av a-amylase i biologiske væsker er delt inn i to store grupper:

1. Saccharifying (reduktometrisk), basert på studien av sukker dannet av stivelse ved reduksjon av glukose og maltose.

2. Amyloklastisk, basert på bestemmelse av rest av uklart stivelse:

• i henhold til intensitetsgraden av sin reaksjon med jod. Disse metodene er mer sensitive og spesifikke, men deres nøyaktighet er i stor grad avhengig av stivelsens kvalitet og optimalisering av bestemmelsesbetingelsene.
• viskositetssuspensjon av stivelse, har ikke høy nøyaktighet og brukes ikke nå.

3. Metoder som bruker kromogene substrater - er basert på bruk av substrat-fargekomplekser, som under a-amylase-virkningen desintegreres for å danne et vannløselig fargestoff.

4. Metoder basert på koblede enzymatiske reaksjoner:

Stivelse + H₂Om Maltose + Maltotriose + Dextrin

Maltose + N₂Omtrent 2 Glukose

Glukose + ATP Glukose - 6 - F + ATP

Glukose-6-F + NADF-glukonat-6-F + NADFN

Aktiviteten til enzymet bestemmes av akkumulasjonshastigheten av NADPH.

To amyloklastiske metoder ble godkjent som forenet: Karavey (med resistent stivelsessubstrat) og Smith-Rohe.

Bestemmelse av amylaseaktivitet med farget
substrat for rekrutteringsselskap "Lachema"

prinsippet

a - Amylase katalyserer hydrolysen av et uoppløselig farget stivelsessubstrat for å danne et blått vannløselig fargestoff. Mengden frigjort fargestoff er proporsjonal med enzymets katalytiske aktivitet.

Bestemmelse av alfa-amylaseaktivitet.

Alfa-amylase (diastase) er et enzym som utfører hydrolytisk spaltning av polysakkarider til dekstriner, maltose og glukose. De endelige produktene av amylase gir ikke fargereaksjon med jod. Bukspyttkjertel og spyttkjertler er rikeste i amylase. Amylase blir utskilt i blodet hovedsakelig fra disse organene.

Humant blodplasma inneholder hovedsakelig to typer amylase: bukspyttkjertel og spyttkjertel, den tredje typen amylase er stor eller makroamylase. Med urin eksporteres bukspyttkjertel amylase hovedsakelig, noe som er en av grunnene til at urin amylasebestemmelse er mer informativ enn i blod for å vurdere funksjonell tilstand av bukspyttkjertelen. Det antas at 65% av urinamylaseaktiviteten skyldes bukspyttkjertelamylase, mens 60% av serumamylolytisk aktivitet er tilveiebragt ved amylasen av spyttkjertlene. Ved akutt pankreatitt øker pankreasamylasen i serum til 89% og i urin til 92% uten å endre salivamylaseindekser.

Aktiviteten av amylase i blod og urin gjennomgår betydelige endringer gjennom dagen, så vel som individuelle forskjeller er notert. Fluktuasjoner av amylaseaktivitet krever at studien i den daglige urinen vurderer bukspyttkjertelen.

Eksisterende metoder for å bestemme aktiviteten av a-amylase er delt inn i 2 grupper:

1. Endepunktsmetoden er basert på å bestemme resten av ufordøyd stivelse i henhold til intensitetsgraden av sin reaksjon med jod (Karavey-metoden).

2. Den kinetiske metoden.

serum a-amylase - 16-30 g / h * l

urin a-amylase - 28-160 g / h * l

1. Serum bør ikke hemolyseres.

2. Forsøkene i forsøket er av stor betydning, spesielt den eksakte inkuberingsperioden på 5 minutter, så det anbefales ikke å gjennomføre en samtidig studie av mer enn 5 sera.

3. Bestemmelsen av aktiviteten av a-amylase i urinen utføres på samme måte som bestemmelsen i blodet, men i tilfelle hyperamylase anbefales det å fortynne urinen med etterfølgende omberegning.

4. Aktiviteten av a-amylase påvirkes av medisiner - antibiotika, smertestillende midler og også alkohol.

En økning i aktiviteten av amylase, forekommer hovedsakelig i sykdommer i bukspyttkjertelen.

Ved akutt pankreatitt øker enzymets aktivitet i blodet og urinen med mer enn 10 ganger. Hyperamalasemi oppstår umiddelbart etter sykdomsutbruddet, når maksimalt 12-24 timer, hvoretter enzymaktiviteten raskt reduseres og kommer til normal i 2-6 dager. Vanligvis varer hypramilazuri lenger enn økningen i enzymaktiviteten i serum, derfor i 2-3 dager etter et smertefullt angrep, er det mer informativt å bestemme aktiviteten av a-amylase i urinen.

Ved kronisk pankreatitt, kreft i bukspyttkjertelen, er økningen i enzymaktiviteten ikke så signifikant. I tillegg kan det være en liten økning i enzymaktivitet i sykdommer ledsaget av et lignende klinisk bilde med akutt pankreatitt: akutt blindtarmbetennelse, peritonitt, perforert magesår, etc.

Derfor gir uttalt amylasemi mulighet til å skille mellom akutt pankreatitt fra kroniske sykdommer i bukspyttkjertelen, samt fra andre akutte sykdommer i bukhulen.

Nesten alltid amylasemi er ledsaget av amylazuria. Men bestemmelsen av urinamylaseaktivitet er en mindre nøyaktig diagnostisk indikator, siden Utgivelsen av amylase i urinen er forbundet med nyrefunksjon. En liten økning i amylase i blodet mens du reduserer nivået i urinen, kan forklares ved brudd på nyreekskretjonsfunksjonen.

En reduksjon i amylaseaktivitet observeres med nekrose i bukspyttkjertelen, leversykdommer (hepatitt, cirrhosis), omfattende forbrenninger, diabetes mellitus, kakseksi, etc.

194.48.155.252 © studopedia.ru er ikke forfatter av materialene som er lagt ut. Men gir mulighet for fri bruk. Er det et brudd på opphavsretten? Skriv til oss | Kontakt oss.

Deaktiver adBlock!
og oppdater siden (F5)
veldig nødvendig

Amylasebestemmelse i biologiske væsker

Amylase i blodet og hva er nivået på denne indikatoren er normal

• Hva er dette enzymet
• Metoder for å bestemme
• norm
• Årsakene til økningen
• lav lesing

En av de viktigste komponentene i den biokjemiske analysen av blod er studien av sin enzymatiske aktivitet. Dette bestemmer plasmakonsentrasjonen av forskjellige enzymer, som hovedsakelig produseres av visse organer. Denne typen spesifisitet gjør at de kan brukes som diagnostiske kriterier for et smalt utvalg av sykdommer. I denne artikkelen vil vi diskutere en slik indikator som amylase-frekvensen, som refererer til spesifikke markører av pankreatisk patologi.

Hva er dette enzymet

I mange år sliter med suksess med hypertensjon?

Instituttets leder: "Du vil bli overrasket over hvor lett det er å kurere hypertensjon ved å ta det hver dag.

Alfa-amylase anses å være en av enzymene av bukspyttkjerteljuice (bukspyttkjertel), som er aktivt involvert i fordøyelsesprosessen. Det produseres av eksocrine celler, og gjennom ekskresjonskanalene kommer inn i tolvfingertarmen, hvor det er ansvarlig for spalting av komplekse karbohydratkomponenter til enklere. De er involvert i nedbrytning av glykogen og stivelse. Sluttresultatet av deres handling bør være produksjon av enkel glukose, som forbrukes av kroppen for å betale tilbake energibehovet til cellene.

Men amylase skal flyte utelukkende i tarmlumen. Normalt går en liten del av det i systemiske sirkulasjonen, siden hver celle i ferd med vital aktivitet har direkte kontakt med blodet. Så lenge integriteten til bukspyttkjertelen ikke brytes, overskrider konsentrasjonen av enzymet ikke grensene for normen. Blodamylase på grunn av sin høye enzymatiske aktivitet, som påvirker kroppens vev, kan forårsake ødeleggelse av dem. Derfor bør mengden holdes på et konstant nivå.

For behandling av hypertensjon bruker leserne våre ReCardio. Å se populariteten til dette verktøyet, bestemte vi oss for å tilby det til din oppmerksomhet.
Les mer her...

Metoder og analyser for å bestemme blodamylaseaktivitet

Amylase i blodet sirkulerer på denne måten: enzymet blir utskilt av glandulære bukspyttkjertelceller, går inn i blodet og bæres til alle fartøyene. I leveren er det delvis nøytralisert. Den delen av enzymet, som ikke har tid til å kollapse, passerer gjennom renalfiltret, der det er konsentrert og utskilt i urinen. Denne mekanismen er grunnlaget for å bestemme konsentrasjonen av alfa-amylase i forskjellige biologiske væsker.

Hovedanalysene inkluderer:

• Biokjemisk analyse for å bestemme alfa-amylase i blodet;
• Biokjemisk analyse av urin for bestemmelse av urinamylase (analyse av diastase).

I klinisk praksis brukes den andre metoden ofte, siden det er teknisk mye lettere å utføre og ikke krever blodprøvetaking. I tillegg er det mer følsomt og spesifikt. Faktisk, i et stabilt stort volum blod og ekstracellulær væske, er enzymet i en mer fortynnet tilstand enn i en liten mengde urin. Derfor er amylaseaktiviteten av urin flere ganger høyere enn blodplasma.

Normal ytelse

Vurdere resultatene av analysen, de bør sammenlignes med visse standarder. Det er viktig å vurdere at normen innebærer en vurdering i enkelte måleenheter. Derfor må du være oppmerksom på de tegnene som er oppført etter tallene i kolonnen med analyseresultater. Dessuten kan amylasehastigheten, som bestemt i forskjellige laboratorier, avvike på grunn av bruk av reagenser av forskjellig følsomhet. Vanligvis er prisen angitt av laboratoriet ved siden av resultatet.

De generelt aksepterte standardindikatorene for diastase og alfa-amylase i tabellen.

Biokjemi, som bestemmer blodets amylaseaktivitet, er preget av at amylase-frekvensen hos kvinner og menn er identisk. Kjønnshormoner har ingen signifikant effekt på dette enzymet.

Årsaker og mekanismer for å øke indikatoren

Den riktige tolkningen av resultatene av analyser for å bestemme konsentrasjonen av amylase i plasma eller urin kan virkelig bidra til å diagnostisere en rekke sykdommer. I klinisk praksis er de hyppigst forekommende situasjoner hvor amylase eller diastase er forhøyet. Dette viser hva som stammer fra:

• Økt sekretorisk aktivitet av bukspyttkjertelen;
• Tilstedeværelsen av hindringer i bukspyttkjertelen eller deres kompresjon, noe som kompliserer utstrømningen av amfetase i bukspyttkjertelen,
• Bekymring av bukspyttkjertelvev er en traumatisk, inflammatorisk, nekrotisk (destruktiv) eller neoplastisk prosess.

Derfor refererer en økning i alfa-amylase og urin diastase til spesifikke markører for slike sykdommer i bukspyttkjertelen og dets kanaler:

1. Med forverring av kronisk pankreatitt;
2. Med akutt pankreatitt, brennvidre i bukspyttkjertelen (selvdestruksjon av kjertelvev med enzymer), peripankreatisk infiltrering, eller i begynnelsen av alvorlig bukspyttkjertelnekrose;
3. Kreft i bukspyttkjertelen. Amylasehastigheten overskrides i større grad når svulsten befinner seg i organets hode og kropp;
4. Ulike typer av kolelithiasis med koledokolithiasis (overføring av steiner inn i gallekanalene);
5. Nedfallet av duodenumets store duodenale brystvorten i form av stenotisk papillitt, kileformede steiner og kreftvulster.

Økt amylaseaktivitet i andre sykdommer og tilstander

Noen ganger må du møte situasjoner der det ikke er noen åpenbare problemer med bukspyttkjertelen, men indikatorene for alfa-amylase og diastase går utover det normale området. Dette betyr at det er:

• Feil i kostholdet;
• Bruken av alkoholholdige drikker;
• Forverring av kronisk cholecystitis og inflammatorisk prosess i leveren;
• Ektopisk graviditet;
• Inflammatoriske destruktive sykdommer i bukorganene (perforert sår, blindtarmbetennelse, peritonitt, tarmobstruksjon og andre);
• Virale infeksjoner ledsaget av polyglandulitt (flere inflammatoriske endringer i nesten alle spytt og bukspyttkjertel). Det skjer med parotitt, cytomegali og Epstein-Barr virusinfeksjon.

lav lesing

Dekryptering av tester, hvis resultater oppnådde en reduksjon i blodets amylaseaktivitet, er sjelden nødvendig. Men fortsatt, noen ganger må du møte det. Dette er mulig med:

• Fullstendig eller nesten fullstendig ødeleggelse av bukspyttkjertelen som følge av bukspyttkjertelnekrose;
• Kreftomdannelse av flertallet av bukspyttkjertelen, hvor det er praktisk talt ingen normale celler med bevarede funksjonelle evner;
• Fjerning av hele eller subtotal reseksjon av bukspyttkjertelen;
• Genetiske forstyrrelser av enzymaktiviteten i kroppen (cystisk fibrose).

Nivået på amylase i blod og urin diastase er et pålitelig flaggskip som indikerer retningen av den diagnostiske banen for sykdommer i bukspyttkjertelen. Korrekt vurdering av tester i kombinasjon med sammenligning av resultatene av andre typer undersøkelser gir liten sjanse for at en rekke sykdommer blir ubemerket.

Klinisk og diagnostisk verdi for å bestemme aktiviteten av alfa-amylase

I blod og urin

Aktiviteten av blodalfa-amylase og urin i løpet av dagen (så vel som fra en dag til en annen) varierer betydelig. I tillegg ble signifikante individuelle forskjeller i disse indikatorene observert i individene uten fordøyelseskanalens patologi. Gitt svingningene i utskillelsen av alfa-amylase i urinen, anbefales det å undersøke enzymets aktivitet i urinen samlet per dag.

Endringer i alfa-amylaseaktivitet i blod og urin oppstår under graviditet. Hyperamylasemia. Aktiviteten av alfa-amylase øker betydelig med sykdommer i bukspyttkjertelen. Ved akutt pankreatitt øker aktiviteten til enzymet i blod og urin 10-40 ganger. Hyperamylasemi oppstår ved sykdomsutbrudd, når maksimalt 12-24 timer etter utvikling, senker raskt og kommer til en norm med 2-6 dager.

Aktiviteten til enzymet kan økes i en rekke sykdommer som har et lignende klinisk bilde med akutt pankreatitt, nemlig: akutt blindtarmbetennelse, peritonitt og perforert mage og duodenalt sår. Hos pasienter med peritonitt er en økning i amylaseaktivitet en konsekvens av utviklingen av amylase-dannende bakterier. Vanligvis øker aktiviteten til enzymet i disse patologiske forholdene med 3-5 ganger.

Sykdommer som forårsaker en relativt liten hyperamylasemi av ikke-pankreatisk opprinnelse (dvs. uten direkte å påvirke selve bukspyttkjertelen) inkluderer kolecystit, cholelithiasis, en tilstand forbundet med galleblærespresjon, nyresykdom, nyresvikt, metastase av en kreftvulst i lungene og spyttkjertelskader. med obturation av deres kanaler (tydelig klinisk bilde av parotitt gjør det enkelt å forklare hyperamylasemi), prostatitt, traumatisk hjerneskade, traumatisk sjokk, brannskader, lungebetennelse, diabetisk ketoacidose, abort, postoperativ periode.

Alfa-amylaseaktiviteten i serum øker også med esophageal perforering, magesår, gastritt, akutt intestinal obstruksjon, iskemi og infarkt i tynntarm, peritonitt, ruptur av røret under ektopisk graviditet, salpingitt, aorta-aneurisme.

Hovedårsakene til hyperamylasemi er: svekket sekretjonsutgang fra kjertler (alfa-amylaseprodusenter), økt permeabilitet av histohematogen barriere i kjertlene, vevnekrose, svekket enzymutslipp gjennom nyretilfilteret.

Noen andre hormoner og mange farmakologiske legemidler, hovedsakelig de midlene som fører til reduksjon av Oddins sphincter, forårsaker adrenalin: adrenalin, histamin, secretin, furosemid, salicylater, antikoagulanter, morfin, pantopon, opium, kodein, tetracyklin og også alkohol.

Til tross for at hyperamylasemi nesten alltid ledsages av peramylazuri, kan bestemmelsen av urin-alfa-amylaseaktivitet ikke alltid være en nøyaktig diagnostisk indikator, siden frigjøring av amylase i urin er forbundet med nyrefunksjon. I tillegg ekskluderer nyrene bare 24% av amylasen utskilt av fordøyelseskjertlene fra blodet.

Studien av alfa-amylaseaktivitet i daglig urin er en mer pålitelig biokjemisk test for å oppdage en sykdom i bukspyttkjertelen enn en studie basert på å analysere en enkelt del av den. Etter aktiviteten av blodalfa-amylase etter at et angrep av pankreatitt vender tilbake til normalt, kan det forbli forhøyet i urinen i opptil 7 dager.

Koeffisienten "blodalfa-amylaseaktivitet / urin alfa-amylaseaktivitet" er en indikator på den funksjonelle nytte av renalfiltret.

Hypoamylamin i klinisk praksis er sjelden. Det observeres hos pasienter med leversykdommer (hepatitt, cirrhose), ondartede svulster (spesielt i nærvær av metastaser i leveren), omfattende forbrenninger, hud, diabetes, hypothyroidisme, vanlige spiseforstyrrelser, vekttap, kakseksi og også under påvirkning av forgiftning ( for eksempel i tilfelle toksikose hos gravide kvinner). En reduksjon i aktiviteten av alfa-amylase indikerer ofte mangel på eksokrine funksjon i sub-gastrisk kjertel. Innføring av sitrater og oksalater fører til en reduksjon i enzymaktiviteten.

Bestemmelse av total laktatdehydrogenaseaktivitet

Laktat dehydrogenase (L-laktat, NAD-oxidoreduktase, EC 1.1.1.27) er et glykolytisk (cytosolisk sinkholdig) enzym (molekylvekt 135.000 D) som reversibelt katalyserer oksydasjonen av L-laktat til pyruvsyre. En uunnværlig deltaker i denne reaksjonen er et oksidert nikotinadieninukleotid, brukt som en koaktor av enzymet som spiller rollen som en hydrogenacceptor.

Reaksjonen katalysert av laktatdehydrogenase kan representeres som følger:

SNSNONSOO "+ OVER + Laktat dehydrogenase SNSSOSOO '+ OVER • H + H +

Enzymet er utbredt i mennesker. I henhold til graden av reduksjon av enzymaktivitet, kan organer og vev arrangeres i følgende rekkefølge: nyrer, hjerte, skjelettmuskler, bukspyttkjertel, milt, lever, lunger, blodserum. I sistnevnte er det funnet flere forskjellige proteiner (isoenzymer) som har de katalytiske egenskapene til dette enzymet. Endringer i strukturen av proteindelen av isoenzymer bestemmer deres forskjellige fysisk-kjemiske egenskaper (spesielt forskjellig elektroforetisk mobilitet i agar, stivelse, polyakrylamid og andre geler).

I plasma (serum) av blod ble det identifisert fem laktat dehydrogeaza isoenzymer - LDG1, LDG2, LDGz, LDG4, LDG5 - som ligger i gelen i avtagende rekkefølge av deres elektroforetiske mobilitet.

Hvert av isoenzymer er en tetramer dannet av underenhetene H og M. Det har blitt fastslått at LDH1 fraksjonen er avledet hovedsakelig fra hjertets vev, LDH5 - fra leveren. LDH i cytoplasma av celler og serum er representert ved 5 isoenzymer.

M-underenheten finnes hovedsakelig i vev med anaerob metabolisme, mens H-underenheten er tilstede i vev med overvekt av aerobiske prosesser. Metoden for elektroforese på bærere bidrar til å dele alle 5 LDH isoenzymer, som representerer følgende prosentandel i blodserum hos friske mennesker: LDH; (14-26%), LDH ^ (29-39%), LDHs (20-26%), LDH4 (8-16%), LDHs (6-16%) - V.N. Titov et al. (1988).

Laktat dehydrogenase er ikke bare inneholdt i plasma, men også i signifikante mengder i røde blodlegemer, slik at serumet som brukes til analysen, må være frisk uten hemolyse.

Metoder for å bestemme total aktivitet av LDH er delt inn i to hovedgrupper: 1) Kinetisk, basert på Warbur-optisk test (optisk effekt assosiert med konvertering av NAD til NAD • N og omvendt) og 2) Metoder som bestemmer mengden av produkt som er dannet eller konsumert substrat etter en fast inkubasjonsperiode (sluttpunktsmetoder).

Arbeid nr. 32 Colorimetrisk dinitrofenylhydrazinmetode for å bestemme aktiviteten av laktatdehydrogenase i blodserum (ifølge Sevel og Tovarek)

Prinsippet av metoden. L-laktat i et alkalisk medium i nærvær av serum LDH og tilsatt NAD oksyderes til pyruvat. I henhold til graden av dannelse og dømme aktiviteten til enzymet.

reagenser

1. 0,45 mol / l oppløsning av natriummelkesyre. I en volumetrisk kolbe med en kapasitet på 100 ml, tilsettes 5 ml melkesyre i en konsentrasjon på 800 g / l og 10 ml melkesyre i en konsentrasjon på 400 g / l og nøytraliseres med en 2N oppløsning av natriumhydroksyd til en svakt alkalisk reaksjon med en pH på 7,5 (ved bruk av fenolftalein, utvikles en svak rosa farge). Mengder bringes til merket med destillert vann.

2. 0,03 mol / l oppløsning av natriumpyrofosfat, pH 8,8. I en volumetrisk kolbe med en kapasitet på 500 ml bidrar 6,69 g Na₂ P₂O₅ • N₂Om lag 50 ml dietter med fortynnet vann blandes blandingen grundig og pH i oppløsningen er justert til 8,8 med 1 N HC1-oppløsning. Volumet av innholdet i kolben justeres til merket med destillert vann. Reagenset er stabilt i en måned når det oppbevares i kjøleskapet.

3. Løsning NAD. 3 mg NAD (kjemisk ren) oppløses i 1 ml destillert vann (med en hastighet på 0,6 mg pr. Prøve). Reagenset er stabilt i 4 uker når det oppbevares i kjøleskapet.

4. En oppløsning av 2,4-dinitrofenylhydrazin. 19,8 mg 2,4-dinitrofenylhydrazin oppløses i et lite volum 1N saltsyreoppløsning ved oppvarming av blandingen i et vannbad. Etter avkjøling justeres volumet til 1 ml med 1 N saltsyre. Neste dag filtreres reagenset. Løsningen lagres i en tallerken med mørkt glass, det kan brukes i et år.

5. 0,4 n natriumhydroksydoppløsning.

6. 1 n saltsyreoppløsning.

7. Standard løsning av pyruvsyre natrium. 11 mg krystallinsk natriumpyruvsyre oppløses i en liten mengde destillert vann, overføres til en 100 ml volumetrisk kolbe, og volumet av løsningen gjøres opp til merket med destillert vann. 1 ml oppløsning inneholder 110 μg natriumpyruvat, som tilsvarer 88 μg pyruvinsyre. Arbeidsstandardløsningen fremstilles ved å fortynne hovedet 10 ganger med destillert vann. I 1 ml av en arbeidsoppløsning på 8,8 μg pyruvsyre.

Forutsetningen. 0,1 ml serumfortynnet 1: 2 blandes med 0,3 ml NAD-oppløsning og oppvarmes i 5 minutter ved 37 ° C. Derefter blir 0,8 ml fosforsyreoppvarmingsoppløsning og 0,2 ml natriummelkesyreoppløsning, tidligere oppvarmet til 37 ° C. Blandingen inkuberes ved 37 ° C i 15 minutter. Etter inkubering fylles prøven med 0,5 ml 2,4-dinitofenylhydrazin og holdes ved romtemperatur i 20 minutter. Deretter tilsettes 5 ml natriumhydroksydoppløsning, bland innholdet i røret og etter 10 minutter

Absorbsjon måles i bølgelengdeområdet 500-560 nm, for eksempel ved en PEC med et grønt lysfilter i en kuvette med en lagtykkelse på 10 mm. Ta opp prøveens optiske tetthet, ta hensyn til absorpsjonskontrollen.

Kontrollprøven settes på samme måte som eksperimentet, men fortynnet 1: 2 serum blir tilsatt etter inkubering av blandingen. Beregn enzymets aktivitet i henhold til kalibreringsgrafen. Aktiviteten av laktatdehydrogenase uttrykkes i mmol pyruvsyre, som dannes ved inkubering av 1 1 serum i 1 time ved 37 ° C.

For å få dataene til å bygge en kalibreringsgraf må du gjøre følgende. Fra en arbeidsstandardløsning av natriumpyruvinsyre, lag en rekke fortynninger (tabell 2). Deretter helles 0,5 ml oppløsning av 2,4-dinitrofenylhydrazin i rør. Deretter behandler standardprøver på samme måte som erfarne.

Når man plasserer kontrollprøven, tilsettes 0,6 ml destillert vann, 0,8 ml pyrofosfatoppløsning og 0,5 ml 2,4-dinitrofenylhydrazinoppløsningen til røret. Deretter behandles prøven tilsvarende erfarne.

For å finne indikatorer for laktatdehydrogenaseaktivitet i dimensjonen "mmol pyruvsyre per 1 liter serum per 1 time inkubering ved 37 ° C" multipliseres antallet μmol pyruvinsyre i standardprøven med en faktor på 120 eller mengden av pyroginsyre med 1,41.

For å uttrykke enzymets aktivitet i enheter av den nye dimensjonen, kan du bruke en annen formel:

Laktat dehydrogenaseaktivitet i mmol / (h • l) = C • 120: 88,

hvor C er mengden μg pyruvinsyre i prøven, er 120 konverteringsfaktoren av μg pyruvinsyre i mg, 88 er faktoren for å omdanne indikatorer fra mg til mmol.

Ved konstruksjon av en kalibreringsgraf på abscisaksen uttrykkes enzymaktivitetsverdiene, uttrykt i dimensjoner, mmol DCH • l) og presenteres i den siste kolonnen i tabell 33. Et rettlinjet forhold mellom konsentrasjonen av pyruvsyre og optisk tetthet er fra 0 til 10 mmol / (h) l).

Klinisk og diagnostisk verdi for å bestemme amylaseaktivitet

Amylase er et enzym som bryter ned stivelse og glykogen. bukspyttkjertelen og spyttkjertlene er de rikeste. Serumamylaseinnhold er forbundet med inntak av mat: i løpet av dagen er aktiviteten høyere enn om natten.

Virkningen av amylase i serum øker (hyperamylasemi) med:

Akutt pankreatitt (10-30 ganger, som kommer til normal i 6-7 dager, hvis aktiviteten forblir økt i mer enn 5 dager, indikerer dette utviklingen av en kronisk prosess);

Forverring av kronisk pankreatitt;

Parotitt (betennelse i spyttkjertlene);

Kan være forårsaket av alkohol, adrenalin, rusmidler.

En reduksjon i aktiviteten av amylase i serum (hypoamylasemi) observeres når:

Leversykdommer (hepatitt, obstruktiv gulsot, cirrhosis);

Økt aktivitet i urinen (hyperamlase) observeres når:

Akutt pankreatitt (har en større diagnostisk verdi enn definisjonen i serum, da den varer mer enn 7 dager);

Nedgangen i enzymaktivitet i urinen (hypoamylase) observeres når:

Svar på spørsmålene:

Gi navn på lokaliseringsstedet, den optimale pH og den biologiske verdien av amylase.

Skriv reaksjonen som amylase katalyserer.

Hvilken klasse av enzymer amylase?

* Hva er de viktigste sykdommene preget av økt aktivitet av amylase. Forklar årsaken.

* Fortell oss om årsakene, typene, laboratoriediagnosen og forebygging av pankreatitt.

3.8. Praktisk arbeid "Bestemmelse av serumaminotransferaseaktivitet".

Målene med praktisk arbeid:

å studere den kliniske og diagnostiske verdien av å bestemme serumaminotransferaser;

lær å bestemme aktiviteten av aminotransferaser i serumet.

Oppgaver for selvstendig arbeid:

Skriv i en notatbok prinsippet og metodikken til det praktiske arbeidet.

Utstyr en arbeidsplass for praktisk arbeid.

Gjør praktisk arbeid.

Gjør de nødvendige beregningene.

Fyll ut skjemaet. Vurder resultatene.

Lag en konklusjon om arbeidet og tegningene.

Svar på flere spørsmål.

Som et resultat av transaminering, som oppstår under virkningen av AsAT og AlAT, dannes oksaloaksiksyre og pyrodruesyrer. Når en oppløsning av 2,4-dinitrofenylhydrazin tilsettes, stopper den enzymatiske prosessen og pyruvsyrehydrazoner opptrer. I et alkalisk medium gir de farging, hvis intensitet er proporsjonal med mengden pyruvsyre som dannes.

1. Referanseløsning natriumpyruvinsyre - 2 mmol / l.

2,4-dinitrofenylhydrazin - 1 mmol / l.

3. Natriumhydroksyd - 0,4 n..

4. Substrate AsAT / Alat.

2. FEC, kuvetter per cm.

4. Testrørstativ.

5. Pipetter for 1 og 5 ml.

Utfør en undersøkelse av aktiviteten av aminotransferaser i serum i henhold til tabellen.

Diagnostisk verdi for å bestemme serumamylaseaktivitet

Hos mennesker blir alfa-amylase utskilt av bukspyttkjertelen og spyttkjertlene. Den lille aktiviteten er funnet i vev i lever- og skjelettmuskler. Molekylmassen av alfa-amylase er relativt lav, i motsetning til de fleste enzymer, filtreres den i glomeruli i nyrene og er inneholdt i urinen. Alfa-amylase består av to isoenzymer: bukspyttkjertype (P-type) og spytt (S-type). Hos friske mennesker utgjør serum ca. 70% av den amylolytiske aktiviteten i spytt isoenzym. I urinen er omtrent samme prosentandel pankreas isoamylase.

Hyperamilasemi og hyperamalazuri er observert i mange sykdommer, men er mest uttalt i akutt pankreatitt, hvor aktiviteten øker hovedsakelig (opptil 90% eller mer) på grunn av bukspyttkjertelisoenzym. Med denne sykdommen ble det høyeste mengde amylase i blod og urin observert i de første 1-3 dagene. Viral hepatitt og bukspyttkjertel kreft forårsaker også bukspyttkjertel hyperamilazuri av bukspyttkjertel opprinnelse.

Ved ikke-pankreatisk hyperamylasemi, inkluderer spyttkjertelskader, nyresvikt. Årsakene til økningen i b-amylase i blodet er nedsatt sekresjon av kjertler som inneholder b-amylase, mangel på nyreutskillelse av amylase fra kroppen.

Mange farmakologiske stoffer, kortikosteroider, salicylater, tetracyklin, furosemid, histamin forårsaker hyperamalasemi. For b-amylase er blod preget av brede intra- og interindividuelle variasjoner. Det mest informative er definisjonen av bukspyttkjertelisoamylase.

Forandringen i aktiviteten av alfa-amylase i patologi.

Bestemmelsen av aktiviteten av alfa-amylase oppnår klinisk og diagnostisk verdi ved diagnose og overvåkning av bukspyttkjertel, fordøyelsessystem, skade på bukhulenes organer. I noen tilfeller (for eksempel i sykdommer i bukspyttkjertelen) er aktiviteten av bare ett isoenzym, alv-amylase i bukspyttkjertelen, av diagnostisk betydning; Når man overvåker sykdommer i fordøyelseskanalen, er det nødvendig å sammenligne enzymaktiviteten i serum (sekretorisk aktivitet og ekstra absorpsjon fra bukhulen) og urin (ofte er amylazuria-graden mer stabil og langvarig indikator enn amylasemi).

Forhøyede alfa-amylaseaktivitetsverdier observeres med:

Inflammatoriske pankreasykdommer (akutt, hovent, kronisk, reaktiv pankreatitt). Hyperamylasemi er vanligvis akutt (10-40 ganger høyere), men ofte er kortvarig hyperamylase også signifikant, men nivået av alfa-amylase i urinen minker mye langsommere enn i blodplasma (serum). Denne egenskapen er praktisk å bruke når "sen" diagnostisk undersøkelse av en pasient med kliniske tegn på pankreatitt, men for å overvåke løpet av prosessen, blir enzymaktivitet vanligvis målt i begge biologiske væsker. Det skal bemerkes at alvorlige former for lesjoner i bukspyttkjertelen med trusselen om vevnekrose, samt pankreatitt, ledsaget av alvorlige lidelser i lipidmetabolismen, kan bli ledsaget av en ekte eller falsk (på grunn av amylaseinhibering av triacylglyserider) reduksjon i enzymaktivitet. Derfor, hvis noen form for pankreatitt er mistenkt, er det diagnostisk viktig ikke bare å bestemme aktiviteten av alfa-amylase i urin og serum, men også å beregne amylazo-kreatininclearance med formelen:

Ved akutt pankreatitt overstiger denne beregnede verdien 6%. Beregning av klaring gjør at du ikke kan korrigere volum og tid for urinoppsamling og gjør resultatet mindre avhengig av de anvendte bestemmelsesmetodene.

Sykdommer i bukhulen, med lignende symptomer med akutt pankreatitt: akutt blindtarmbetennelse, peritonitt, perforert magesår og duodenalt sår. Alfa-amylase-aktivitet blir øket med omtrent 3 til 5, sjelden - 10 ganger, den viktigste grunnen giperamilaziemii er ikke så mye øket sekresjon av enzymet som sekundær suge det ut av bukhulen til blodet. For å differensiere diagnosen utføres bestemmelsen av alfa-amylase og kreatinin i urinen og beregningen av kreatininclearance ved anvendelse av formelen ovenfor. Med en konstant verdi på clearance fra 1 til 4%, bør det være mistenkt sykdommer i bukorganene, masquerading som akutt pankreatitt.

Av samme grunn øker alfa-amylaseaktiviteten betydelig med esophageal perforering, gastritt, akutt intestinal obstruksjon, iskemi og tarminfarkt, tubal ruptur, salpingitt, aorta-aneurisme.

I sykdommer i indre organer som ikke er direkte forbundet med fordøyelsessystemet, er det mulig å oppnå en moderat økning i aktiviteten av total alfa-amylase og / eller dets isoenzymer. Slike sykdommer inkluderer: cholecystitis, cholelithiasis, skade på nyrene parenchyma og inflammatoriske sykdommer i dette organet, nyresvikt, prostatitt, diabetisk ketoacidose, metastaser av ondartede svulster i vev og organer (spesielt i lungene, bukspyttkjertelen, tverrgående tykktarm). Hvis de nevnte patologiene mistenkes, utføres en sammenlignende analyse av total og pankreatisk alfa-amylase, siden sykdommene i isoenzymet hovedsakelig øker i de beskrevne sykdommer (den onkologiske skade på bukspyttkjertelen og tverrgående tykktarm øker aktiviteten til både P- og S-isoenzymer, som gjør det mulig å skille fra inflammatoriske sykdommer i samme organer).

Hyperamalasemi av ikke-pankreatisk opprinnelse forekommer også i sykdommer i spyttkjertlene og visse hjernesykdommer. I dette tilfellet oppstår en økning i alfa-amylaseaktiviteten i tillegg på grunn av økt aktivitet av spytt isoenzym, og for å differensiere diagnosen, bør en parallell måling av alfa-amylase i alvle og pankreas utføres (med normal aktivitet av P-amylase kan den nevnte patologien mistenkes).

Sammenligningsanalyse av alfa-amylaseaktivitet i urin og serum er også en verdifull diagnostisk parameter ved vurdering av nyrepatologi. I lesjoner nedsatt filterfunksjonen (for nefrotisk syndrom, glomerulonefritt, etc.) Aktiviteten av a-amylase i urin markert redusert, mens blod angitt moderat eller stor hyperamylasemia imidlertid koeffisienten "Amylase serum / amylase urin" er en hoveddiagnostiske parametere med denne patologien.

Postoperative tilstander (systemisk inflammatorisk respons på kirurgi, utvikling av ARDS, etc.) kan også forårsake moderat hyperamylasemi.

Senking av aktiviteten til a-amylase følger typisk en reduksjon i den funksjonelle aktiviteten til bukspyttkjertelen indusert parenkymvev og / eller svekket regulering av eksokrint og oftest forekommer når:

Nekrotiske forandringer i bukspyttkjertelen assosiert med hemorragisk pankreatitt og total pankreasnekrose.

Med leversykdommer (hepatitt, cirrhosis). Maligne svulster, spesielt i levermetastase.

Alvorlig endokrin ubalanse: hypothyroidisme, diabetes mellitus, hyperlipemi (spesielt med et overskudd av triacylglyserider, på grunn av inhibering av enzymets aktive senter), med generell ernæringsforstyrrelse, kakseksi og toksikose hos gravide kvinner.

I noen tilfeller kan serumaktiviteten av alfa-amylase, med de ovenfor beskrevne patologier, ikke reduseres, men forbli uendret.

De viktigste forholdene i differensialdiagnosen av patologier med lignende symptomer.

De vanligste forholdene er:

Total alfa-amylase / bukspyttkjertelkomponent. Brukes i differensial diagnose av inflammatoriske og ondartede prosesser i bukorganene og noen andre vev. I inflammatoriske prosesser som ikke påvirker bukspyttkjertelen, er hovedkilden for aktivitet av total alfa-amylase spytt enzym, derfor forholdet "Total amylase / pankreas isoform"> 1. Ved ondartet skade på bukhulen er bidraget fra begge isoenzymer omtrent det samme, og denne koeffisienten er omtrent like, 8-2,4. Ved involvering av bukspyttkjertelen i den inflammatoriske prosessen eller i nærvær av tumormetastaser i den, overstiger forholdet mellom total og pankreasamylaseaktivitet ikke 1,5.

Totalt alfa-amylase / kreatinin i urin og serum. Bruk beregnede klaring (formel som er gitt i avsnitt 3), muliggjør differensiering av den inflammatoriske prosessen i bukspyttkjertelen (forholdet overskrider 6%) og mage (1-4%).

Totalt serum alfa-amylase / Total urin alfa-amylase. Brukes til å vurdere funksjonaliteten til nyrefilteret. I nefrotisk syndrom og glomerulonephritis er koeffisienten høyere enn 2-2,5.

Totalt serum alfa-amylase / Serum Triglycerides. Forholdet er "invers", siden et overskudd av triacylglyserider kan hemme aktiviteten av alfa-amylase. Det gjør det mulig å skille mellom den patologiske nedgangen i enzymproduksjonen og forstyrrelsen av hyperipmi.

Totalt serum alfa-amylase / bukspyttkjertel lipase. Den biologiske og diagnostiske betydningen av koeffisienten er lik den for det foregående forholdet, siden nærværet av frie triacylglyserider i serum er direkte relatert til aktiviteten av bukspyttkjertellipase. Andelen er direkte.

Endringer i alfa-amylaseaktivitet hos friske mennesker. Interferens med rusmidler.

Aktiviteten av alfa-amylase i blodplasma hos friske mennesker avhenger i stor grad av diettens natur og matvarer som råder i dietten. I tillegg avhenger denne parameteren sterkt av intensiteten av metabolske prosesser i et bestemt individ, så vel som på hjernens aktivitet av subjektet. Derfor kan aktiviteten til enzymet i samme individ på forskjellige tidspunkter (selv i løpet av samme dag) variere i området 25-50% i begge retninger.

Hyperamylasemi hos friske mennesker kan skyldes en følelsesmessig tilstand (stress, økt mental aktivitet), drikking (en gang en gang) av alkohol, og er også forbundet med en diett rik på protein og utarmet i karbohydrater og sukkerarter. Hypoamylasemi oppstår med økning i glukoseutnyttelse, med fastende, aktiv trening, samt hos personer med hyperlipidemi, selv i fravær av kliniske manifestasjoner.

I svangerskapet i opptil 19 uker senkes alfa-amylaseaktiviteten i forhold til normen, når det gjelder opp til 33-34 uker av svangerskap, øker aktivitetsnivået og ved 37-40 uker stabiliseres det på nivå 10-20% høyere enn enzymaktiviteten hos friske, ikke-gravide kvinner.

På aktiviteten av alfa-amylase og dens isozym pankreatisk betydelig innflytelse tilveiebringer også anvendelse av en rekke vanlige stoffer som forbrukes av friske personer i tilfelle av transiente infeksjonssykdommer og inflammatoriske forstyrrelser - f.eks tetracyklin-antibiotika, furosemid, kortikosteroid-anti-inflammatoriske legemidler, salisylater.

Også en betydelig virkning på aktiviteten til a-amylase har medikamenter, noe som fører til en reduksjon i den sphincter av Oddi, herunder - hormoner (adrenalin, histamin, sekretin), narkotika (morfin, pantopon, opium, kodein) og andre legemidler som øker sekresjon av enzymet og undertrykke utløpet av sekresjon fra bukspyttkjertelen.

Basert på biofile.ru

Metodens prinsipp: Maltotriosid assosiert med kromogen 2-klor-p-nitrofenol brukes som substrat for a-amylase. Under virkningen av a-amylase hydrolyseres substratet for å frigjøre farget 2-klor-p-nitrofenol, maltotriose og glukose. Reaksjonen går fort og krever ikke tilstedeværelse av koenzymer i reaksjonsblandingen. Graden av substrathydrolyse er direkte proporsjonal med aktiviteten av a-amylase i prøven og måles spektrofotometrisk ved en bølgelengde på 405 nm.

Substrate-CNF ----> CNF + Glukose + Maltotriose

Linearitet av metoden: opptil 1500 U / l.

a-amylase i ikke-hemolysert serum forblir stabilt ved romtemperatur (18-25 ° C) i 7 dager ved en lagertemperatur på 2-8 ° C i 2 måneder.

1) Et spektrofotometer med en temperaturstyrt kyvett, en bølgelengde på 405 nm, en optisk bane lengde på 1 cm; reaksjonstemperatur 37 ° C;

3) Automatiske pipetter for 25 μl og 1000 μl;

Spyttvæske kan også brukes som en kilde til enzym (spytt er tidligere fortynnet med destillert vann 100 ganger), men rekkevidden av norm varierer sterkt.

6) Arbeidsreagens (substrat - 1,8 mmol / l i MES-buffer (pH 6,0 ± 0,1)).

Arbeidsreagenset er egnet for bruk hvis dets optiske tetthet ikke er høyere enn 0,6 enheter med optisk tetthet. ved en bølgelengde på 405 nm og det er ingen turbiditet.

Før analysen må reagensene oppvarmes til måltemperaturen (37 ° C).

Rør innholdet i røret og slå på stoppeklokken. Mål den optiske densiteten til prøven mot destillert vann i en lengde på 405 nm i nøyaktig 1 minutt. Gjenta målingen 3 ganger med et intervall på 1 min. Beregn endringen i optisk tetthet per minutt, og beregne deretter gjennomsnittlig måling av optisk tetthet per minutt (Dop / min).

Beregningen av aktiviteten av a-amylasefaktor utført med formelen:

hvor Dop / min er den gjennomsnittlige endringen i optisk tetthet per minutt;

1,025 - totalvolumet av løsningen i kuvetten;

1000 er konverteringsfaktoren ml til l;

12,9 millimolar absorpsjonskoeffisient av 2-klor-p-nitrofenol;

0,025 er volumet av serum i ml;

1,0 er den optiske banen lengden.

Når noen endringer gjøres i de listede parametrene, må faktoren omregnes. Hvis aktiviteten av a-amylase overstiger 1500 U / l (et punkt utenfor linjaliteten til kalibreringsgrafen), skal det analyserte serum fortynnes 1: 1 med en saltoppløsning og målingene gjentas, og resultatet av beregningen skal multipliseres med 2.

Klinisk og diagnostisk verdi: a-Amylase er en endohydrolase og i kroppen er representert av flere isoenzymer: enzymet utskilles av spytkjertlene (S-type), bukspyttkjertelen (P-type); liten enzymaktivitet finnes i leveren, skjelettmuskulaturen, tårevæsken, utskillelsen av brystkjertlene og ulike tumorer.

Aktiviteten av a-amylase i serum øker betydelig på grunn av P-isoenzymet i ulike sykdommer i bukspyttkjertelen (pankreatitt, abscess, traumer, kreft).

Med skader på spyttkjertlene (spyttkjertelkreft, endemisk parotitt, makroamylasemi) øker serum-amylaseaktiviteten også, men på bekostning av S-isoenzymet.

Begge a-amylase isoenzymer har en liten molekylvekt (45 000), slik at de filtreres i nyrene og utskilles i urinen. En økning i aktiviteten av urinamylase (diastase) ved akutt pankreatitt oppstår 6-10 timer senere enn i blodserum.

Basert på biohimist.ru

Prinsippet av metoden. Alfa-amylase katalyserer hydrolysen av et uoppløselig farget stivelsessubstrat for å danne et blått vannløselig fargestoff. Mengden frigjort fargestoff er proporsjonal med enzymets aktivitet.

Forutsetningen. For å bestemme aktiviteten av alfa-amylase i serum eller urin fremstilles i parallelle eksperimentelle og kontrollprøver og analyseres i følgende rekkefølge:

Prøver blandes, får stå i 15 minutter, sentrifugert ved 3000 rpm i 5 minutter. Mål deretter den optiske tettheten til forsøksprøven mot kontrollen ved FEC ved en bølgelengde på 590 nm i kuvetter med en lagtykkelse på 5,0 mm.

Aktiviteten til enzymet er funnet på kalibreringsskjemaet.

Klinisk og diagnostisk verdi for å bestemme aktiviteten av alfa-amylase i serum og urin: hos mennesker blir alfa-amylase utskilt av bukspyttkjertelen og spyttkjertlene. Den lille aktiviteten er funnet i leverenvev og skjelettmuskler. Molekylvekten til enzymet er relativt lav ("48 000), så det filtreres i glomeruli i nyrene og er inneholdt i urinen.

Hos friske mennesker er serum enzymaktivitet fra 140 til 350 U / l, i urin fra 1000 til 2000 U / l. Amylaseaktivitet øker, hovedsakelig i sykdommer i bukspyttkjertelen (ved akutt pankreatitt). Sykdommer i spyttkjertlene og kroniske nyresykdommer fører til en økning i aktiviteten av serum-alfa-amylase.

Arbeidsnummer 5. Virkningen av adrenalin på glukose i blodet.

Fremgang av arbeidet. I en kanin, fra øreens marginale vene eller i rotte fra kaudalvenen, oppsamles 0,1 ml blod og blodglukosen bestemmes av o-toluidinmetoden.

Dyret har da hårklipp på sin side, gni huden med alkohol og 0,1% oppløsning av adrenalin tas subkutant i en mengde på 0,1 ml per 1 kg og etter 30 minutter måles blodglukosen igjen.

Arbeidsnummer 6. Virkningen av insulin på blodsukker.

Fremgang av arbeidet. Fra en annen kanin fra øreens marginale vene eller fra rotte fra kaudalvenen, ta 0,1 ml blod og bestem glukoseinnholdet i blodet.

I dyret skar pelsen på sin side, behandler den med alkohol og injiser subkutant insulin med en hastighet på 1,5 internasjonale enheter pr. Kg vekt. En time senere, bestem igjen blodsukkeret. Innfør dyret subkutant med 5% glukoseoppløsning for å hindre insulin sjokk: kanin 10 ml, rotte - 1 ml.

Resultatene fra 3. og 4. går til bordet og trekker konklusjoner.

Basert på materialer www.ronl.ru

α - Amylase (diastase, 1,4 - a - D - glukanhydrolase, EC 3.2.1.1.) katalyserer hydrolysen av a - 1,4 - glukosidbindinger av stivelse, glykogen og deres beslektede polysakkarider til maltose, dextriner og andre polymerer. Molekylærmassen til enzymet er ca. 48 000 D. Molekylet inneholder et kalsiumatom som ikke bare aktiverer enzymet, men beskytter det også mot virkningen av proteaser, og aktiviteten av amylase øker med påvirkning av klorioner. I blodet er det representert av to isoenzymer: bukspyttkjertel - P-type og spytt - S-type, som hver er delt inn i flere fraksjoner. S-type isoenzym er generelt 45-70% (i gjennomsnitt 57%), resten er i P-typen. Begge isoenzymer har nesten identiske katalytiske og immunologiske egenskaper, avvike noe i elektroforetisk mobilitet, men er godt separert ved gelfiltrering på DEAE - Sephadex. Det er også makroamylase, som ikke utskilles av nyrene, men kan finnes i normalt blodserum (ca. 1% av friske mennesker) og patologi (2,5%).

Høy amylaseaktivitet observeres i parotid og bukspyttkjertelen. Imidlertid er dens aktivitet, men mye lavere, funnet i de store og tynne tarmene, skjelettmuskler, lever, nyrer, lunger, eggleder, fettvev. I blodet er enzymet forbundet med både plasmaproteiner og dannede elementer. Enzymeaktiviteten er den samme for menn og kvinner, og er ikke avhengig av innholdet av maten som er tatt og tidspunktet på dagen.

Eksisterende metoder for å studere aktiviteten av a-amylase i biologiske væsker er delt inn i to store grupper:

1. Saccharifying (reduktometrisk), basert på studien av sukker dannet av stivelse ved reduksjon av glukose og maltose.

2. Amyloklastisk, basert på bestemmelse av rest av uklart stivelse:

• i henhold til intensitetsgraden av sin reaksjon med jod. Disse metodene er mer sensitive og spesifikke, men deres nøyaktighet er i stor grad avhengig av stivelsens kvalitet og optimalisering av bestemmelsesbetingelsene.
• viskositetssuspensjon av stivelse, har ikke høy nøyaktighet og brukes ikke nå.

3. Metoder som bruker kromogene substrater - er basert på bruk av substrat-fargekomplekser, som under a-amylase-virkningen desintegreres for å danne et vannløselig fargestoff.

4. Metoder basert på koblede enzymatiske reaksjoner:

Stivelse + H₂Om Maltose + Maltotriose + Dextrin

Maltose + N₂Omtrent 2 Glukose

Glukose + ATP Glukose - 6 - F + ATP

Glukose-6-F + NADF-glukonat-6-F + NADFN

Aktiviteten til enzymet bestemmes av akkumulasjonshastigheten av NADPH.

To amyloklastiske metoder ble godkjent som forenet: Karavey (med resistent stivelsessubstrat) og Smith-Rohe.

a - Amylase katalyserer hydrolysen av et uoppløselig farget stivelsessubstrat for å danne et blått vannløselig fargestoff. Mengden frigjort fargestoff er proporsjonal med enzymets katalytiske aktivitet.